GB/T 36806-2018
甘蔗桿狀病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法
Detection of Sugarcane bacilliform virus by real-time PCR
GBT36806-2018, GB36806-2018
1. 檢測(cè)原理
基于SCBV病毒RT/RNase H基因保守序列設(shè)計(jì)的特異性引物和TaqMan探針，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)病毒核酸的定性檢測(cè)。
2. 儀器設(shè)備操作規(guī)范
| 儀器名稱(chēng) | 技術(shù)參數(shù) | 校準(zhǔn)要求 |
|---|---|---|
| 實(shí)時(shí)熒光PCR儀 | 升降溫≥2℃/s，溫度均一性±0.5℃ | 每月進(jìn)行溫度校準(zhǔn) |
| 高速離心機(jī) | ≥12000g | 每季度校驗(yàn)轉(zhuǎn)速 |
3. 關(guān)鍵試劑配制
3.1 CTAB緩沖液
配方：100mmol/L Tris-HCl(pH5.0)+20mmol/L EDTA-Na2+1.4mol/L NaCl+2%CTAB，使用前添加0.1% β-巰基乙醇
3.2 熒光PCR反應(yīng)體系
| 2×熒光PCR反應(yīng)液 | 12.5μL |
| 引物(10μmol/L) | 各2.25μL |
| TaqMan探針 | 0.625μL |
4. 標(biāo)準(zhǔn)操作流程
- 樣品處理：葉片液氮研磨/蔗汁3000g離心取上清
- DNA提取：CTAB法提取，A260/A280需1.8-2.0
- PCR擴(kuò)增：95℃ 10min→(95℃ 15s→60℃ 1min)×40循環(huán)
- 結(jié)果判讀：
- 陽(yáng)性：Ct≤35.0且有擴(kuò)增曲線(xiàn)
- 可疑：35.0
5. 質(zhì)量控制
| 對(duì)照類(lèi)型 | 預(yù)期結(jié)果 |
|---|---|
| 陽(yáng)性對(duì)照 | Ct≤30.0 |
| 陰性對(duì)照 | 無(wú)Ct值 |
| 空白對(duì)照 | 無(wú)擴(kuò)增曲線(xiàn) |
注意：所有離心操作均在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，避免氣溶膠污染
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- 標(biāo)準(zhǔn)號(hào)
- GB/T 36806-2018
- 別名
- GBT36806-2018
GB36806-2018 - 發(fā)布
- 2018年
- 總頁(yè)數(shù)
- 10頁(yè)
- 發(fā)布單位
- 國(guó)家質(zhì)檢總局
- 當(dāng)前最新
- GB/T 36806-2018
甘蔗桿狀I(lǐng)M病毒（Sugarcane bacilliform IM virus，SCBIMV）和甘蔗桿狀MO病毒（Sugarcane bacilliform MOirus，SCBMOV)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法的儀器與設(shè)備、試劑與材料、樣品的采集與前處理、檢測(cè)以及結(jié)果判斷與表述等 適用于可能帶有SCBIMV和SCBMOV病毒的活體寄主植物的快速檢測(cè)、診斷
GB/T 36806-2018 中提到的儀器設(shè)備
| 實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測(cè)儀 激發(fā)/檢測(cè)波長(zhǎng)范圍350nm~750nm，升降溫速度≥2.0℃/s，溫度范圍4℃~100℃ | 用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和分析PCR擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào) |
| 核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計(jì) | 用于測(cè)量DNA濃度及純度（A260/A280比值） |
專(zhuān)題
GB/T 36806-2018相似標(biāo)準(zhǔn)
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