GB/T 36806-2018
甘蔗桿狀病毒實時熒光PCR檢測方法
Detection of Sugarcane bacilliform virus by real-time PCR
GBT36806-2018, GB36806-2018
1. 標準背景與制定意義
GB/T 36806—2018標準是針對甘蔗桿狀病毒（Sugarcane bacilliformvirus，SCBV）的實時熒光PCR檢測方法。該標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口，主要起草單位包括福建農林大學國家甘蔗工程技術研究中心、農業(yè)部甘蔗及制品質量監(jiān)督檢驗測試中心等。
2. 方法原理與技術優(yōu)勢
本標準采用實時熒光PCR技術，通過特異性引物和TaqMan探針實現(xiàn)對甘蔗桿狀病毒的快速檢測。其核心在于：
- 實時熒光PCR儀用于擴增和監(jiān)測目標DNA片段。
- TaqMan探針的雙標記技術（FAM-TAMRA）實現(xiàn)了對擴增產物的定量檢測。
- CT值分析是判斷樣品是否含病毒的關鍵指標。
該方法具有高靈敏度、高特異性和快速的特點，適用于甘蔗植株和種苗的大規(guī)模檢疫。
3. 檢測步驟與關鍵數(shù)據(jù)
| 檢測步驟 | 操作要點 | 關鍵參數(shù) |
|---|---|---|
| 樣品采集 | 葉片或蔗汁樣本采集，避免交叉污染 | -1葉帶葉上一葉、1mL蔗汁 |
| DNA提取 | CTAB緩沖液法提取總DNA | 65°C保溫60分鐘，離心分離 |
| PCR擴增 | 實時熒光PCR反應體系配制 | 2×熒光PCR反應液、5'-引物、3'-引物、TaqMan探針 |
實際應用案例
某甘蔗種植區(qū)采用本標準檢測發(fā)現(xiàn)，部分樣品CT值為28.5，符合陽性判定標準（≤35），確認含有SCBIMV病毒。
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- 標準號
- GB/T 36806-2018
- 別名
- GBT36806-2018
GB36806-2018 - 發(fā)布
- 2018年
- 總頁數(shù)
- 10頁
- 發(fā)布單位
- 國家市場監(jiān)督管理總局、中國國家標準化管理委員會
- 當前最新
- GB/T 36806-2018
甘蔗桿狀IM病毒（Sugarcane bacilliform IM virus，SCBIMV）和甘蔗桿狀MO病毒（Sugarcane bacilliform MOirus，SCBMOV)實時熒光PCR檢測方法的儀器與設備、試劑與材料、樣品的采集與前處理、檢測以及結果判斷與表述等 適用于可能帶有SCBIMV和SCBMOV病毒的活體寄主植物的快速檢測、診斷
GB/T 36806-2018 中提到的儀器設備
| 實時熒光 PCR 檢測儀 激發(fā)/檢測波長范圍350nm~750nm，升降溫速度≥2.0℃/s，溫度范圍4℃~100℃ | 用于實時監(jiān)測和分析PCR擴增過程中的熒光信號 |
| 核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計 | 用于測量DNA濃度及純度（A260/A280比值） |
專題
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