生物樣品的前處理技術(shù)--蛋白質(zhì)的提取
由于大部分蛋白質(zhì)都能溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液,所以蛋白質(zhì)的提取一般是以水溶液為主,其中鹽溶液和緩沖溶液對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性好、溶解度大,是提取蛋白質(zhì)最常用的溶劑。當(dāng)細(xì)胞粉碎后,用鹽溶液或緩沖溶液提取蛋白質(zhì)時,應(yīng)注意以下一些條件。
(1)鹽濃度
常用等滲鹽溶液,尤其以0.02～0.05mol/L磷酸緩沖溶液和碳酸緩沖落液、0.15mol/L氯化鈉溶液應(yīng)用較多。但有些蛋白質(zhì)在低鹽濃度下溶解度較低,需用濃度較高的鹽溶液,如脫氧核糖核蛋白需用1mol/L以上的氯化鈉溶液提取;而另一些蛋白質(zhì)則在低鹽濃度溶液或水中溶解度較高,如某些霉菌中的脂肪酶用水提取效果更好。因此,在用水溶液提取蛋白質(zhì)時,需根據(jù)所要提取的蛋白質(zhì)來選擇不同種類和不同濃度的鹽溶液。
(2)pH值
由于蛋白質(zhì)的溶解度和穩(wěn)定性與pH值關(guān)系很大,因此pH值的選擇對蛋白質(zhì)的提取十分重要。提取蛋白質(zhì)時,提取溶液的pH值應(yīng)選定在該蛋白質(zhì)的穩(wěn)定范圍,在該蛋白質(zhì)等電點的兩側(cè),提取堿性蛋白質(zhì)時要選在偏酸一側(cè),提取酸性蛋白質(zhì)時要選在偏堿一側(cè),以增大蛋白質(zhì)的溶解度,提高提取的效率。
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