[機(jī)械法]細(xì)胞破碎的方法、原理和優(yōu)缺點(diǎn)
1、高速組織搗碎機(jī)
搗碎機(jī)轉(zhuǎn)速可達(dá)10,000r/min,具高速轉(zhuǎn)動(dòng)的鋒利的刀片,宜用于動(dòng)物內(nèi)臟組織的破碎。
操作:將材料配成稀糊狀液,放置于筒內(nèi)約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調(diào)速器先撥至最慢處,開(kāi)動(dòng)開(kāi)關(guān)后,逐步加速至所需速度。
特點(diǎn):由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
2、組織勻漿器
制作勻漿器的材料通常用玻璃,還可以用硬質(zhì)塑料、不銹鋼、人造熒光樹(shù)脂等。
操作:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來(lái)回研磨,上下移動(dòng),即可將細(xì)胞研碎。
特點(diǎn):勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高,適用于量少和動(dòng)物臟器組織。
但是,這種方法也較易造成堵塞;團(tuán)狀或絲狀真菌、較小的革蘭氏陽(yáng)性菌以及某些亞細(xì)胞器,質(zhì)地堅(jiān)硬,易損傷勻漿閥,也不適合用該法處理。
3、研缽
多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料,研磨時(shí)常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
值得注意的是:在研磨過(guò)程中局部往往生熱導(dǎo)致變性或pH值變化,尤其是研磨玻璃粉和氧化鋁時(shí);而且磨細(xì)劑的吸附也可導(dǎo)致?lián)p失。
4、細(xì)菌磨
是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時(shí)先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞完全磨碎。