超聲法破碎細(xì)胞提蛋白質(zhì)的具體步驟
這樣說吧，如果我們用原核表達(dá)載體表達(dá)一段目標(biāo)基因，我們先把這個基因通過酶切連接的原核表達(dá)載體上，再轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，常用的誘導(dǎo)物是IPTG，37度誘導(dǎo)表達(dá)4小時，這樣表達(dá)出的目標(biāo)蛋白一般以包涵體的形式存在細(xì)菌內(nèi)，然后用超聲破碎細(xì)菌，首先將吸取5ml的細(xì)菌放入試管中，然后放在超聲儀中，開80hz的頻率進(jìn)行破碎細(xì)菌，待到細(xì)菌全部破碎，溶液變清亮為止，然后你可以洗滌沉淀，進(jìn)行包涵體蛋白的收集，后面你可以做一個SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳和Western-blot，這樣就可以確定你的要蛋白是不是你的蛋白。
最后，你可以大量的搖菌提取蛋白質(zhì)了，祝你好運(yùn)，我也是做這方面的研究，已經(jīng)做到蛋白質(zhì)電泳這一步了，祝你好運(yùn)。
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