剛果紅鑒別纖維素測定方法
用這方法判斷酶活力大小的,實際上剛果紅是結合到培養(yǎng)基的多糖底物,但分解纖維素的細菌可以產(chǎn)纖維素酶,能分解這個多糖底物成為寡糖,這樣剛果紅就不能結合上去了,氯化鈉呢就可以使結合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大大小小的透明圈,大的透明圈當然分解纖維素的能就強。
剛果紅染色法的原理
剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物.當纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅——纖維素的復合物就無法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌.
剛果紅染色法：
常用的剛果紅染色法有兩種,一種是先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進行顏色反應,另一種是在倒平板時就加入剛果紅.
方法一 在長出茵落的培養(yǎng)基上,覆蓋質(zhì)量濃度為1 mg／mI.的CR溶液,10～15 min后,倒去CR溶液,加入物質(zhì)的量濃度為l mol／I.的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此時,產(chǎn)生纖維素酶的茵落周圍將會出現(xiàn)透明圈.
方法二 配制質(zhì)量濃度為10 mg／mI.的CR溶液,滅菌后,按照每200 mI.培養(yǎng)基加入1 mI.的比例加入CR溶液,混勻后倒平板.等培養(yǎng)基上長出茵落后,產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會出現(xiàn)明顯的透明圈.
兩種剛果紅染色法的比較
剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應用已經(jīng)有超過20年的歷史,課本中給出了兩種方法.方法一是傳統(tǒng)的方法,缺點是操作繁瑣,加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用.方法二的優(yōu)點是操作簡便,不存在菌落混雜問題,缺點是由于在纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應.但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分.方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的能力,它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅而形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分.
