(1)試驗(yàn)組:平皿法計(jì)數(shù)時(shí),取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液1ml和50-100CFU試驗(yàn)菌,分別注入平皿中,立即傾注瓊脂培養(yǎng)基,每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿,按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。薄膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)時(shí),取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液,過(guò)濾沖洗,在最后一次的沖洗液中加入50-100CFU試驗(yàn)菌,過(guò)濾,按薄膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。

(2)菌液組:測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。

(3)供試品對(duì)照組:取規(guī)定量供試液,按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)。

(4)稀釋劑對(duì)照組:若供試液制備需要分散、乳化中和、離心或薄膜過(guò)濾等特殊處理時(shí),應(yīng)增加稀釋劑對(duì)照組,以考察供試液制備過(guò)程中微生物受影響的程度。試驗(yàn)時(shí),可用相應(yīng)的稀釋液替代供試品,加入試驗(yàn)菌,使最終菌濃度為每1ml供試液含50-100CFU,按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。

(5)結(jié)果判定:在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中,稀釋劑對(duì)照組的菌回收率(稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率)應(yīng)均不低于70%。

若試驗(yàn)組的菌回收率(試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率)均不低于70%,照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù);若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率低于70%,應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性,并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。