液相色譜柱的選擇、使用、保護和常見故障的掃除
液相色譜柱的選擇、應(yīng)用、保護和故障排除一般分為正柱和反相柱。
正相柱多為硅膠柱，或硅膠表面帶有CN，-NH3等官能團的鍵合硅膠柱。反相柱主要以硅膠為填料，非極性十八烷基官能團(ODS)為C18柱。其他常用的逆柱是C8、C4、C2和苯基柱。還有離子交換柱、GPC柱、聚合物填充柱等。本文介紹了反相色譜柱的選擇和應(yīng)用.
一、反相色譜柱的挑選
1.柱子的PH值運用規(guī)模 反相柱長處是固定相安穩(wěn)，運用廣泛，可運用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料，運用時必定要留意活動相的PH規(guī)模。通常情況下，C18柱的pH值為2~8，活性相的pH值小于2，這將導(dǎo)致鍵合相的水解；當pH值大于7時，硅膠容易溶解；緩沖固定相常用于降解。一旦發(fā)生這種情況，列總數(shù)就會下降。同一填料不同等級的色譜柱是不同的。如果活性相PH值較高或經(jīng)常使用緩沖液，則建議選擇較大PH值的色譜柱，如Diane的贊許柱PH 2 9或Zorbax PH 2 11。 5的柱子。
2.填料的端基封尾（或稱封口）
采用封口技術(shù)，利用填料中殘留的硅羥基封接端基，可改善極性化合物的吸附或尾礦，增加碳含量，不易貯存，填料穩(wěn)定性好，組分保存時間好。如果要分析的樣品是酸性或堿性化合物，好使用端到端密封的填料塔。
二、液相色譜柱的運用
在使用色譜柱之前，好對色譜柱的功能進行測試，并將測試結(jié)果保存下來，作為今后評估色譜柱功能變化的參考。柱函數(shù)測試應(yīng)根據(jù)色譜柱工廠報告中的條件(工廠試驗中使用的條件為佳條件)進行，只要測量結(jié)果具有可比性。然而，應(yīng)該注意的是，柱的功能可能會因樣品、活性相、柱溫度和其他使用條件的不同而有所不同。
1、樣品的前處理
好運用活動相溶解樣品。
預(yù)處理柱用于去除樣品中的強極性或柱填料的不可逆吸附。
采用0.45μm濾膜去除顆粒雜質(zhì)。
2、活動相的制造
液相色譜是指樣品組分在柱填料和活性相之間進行質(zhì)量交換以達到分離的目的，因此活性相必須具有以下特性：
答：活性樣品相對于樣品具有一定的溶解性，這可以確保樣品成分不會被存放在柱中(或在柱中保存很長時間)。
活性相和樣品不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
為了獲得良好的分離效果，活性相的粘度應(yīng)盡可能??；降低塔的壓降，延長泵的使用壽命(可采用遞升溫法降低活性相的粘度)。
活性相的物理化學(xué)性質(zhì)應(yīng)與所使用的檢測器相適應(yīng)。優(yōu)選地使用低紫外吸收的溶劑來使用紫外檢測器。
即活化相的沸點不能太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，不能進行試驗。
在生產(chǎn)活動階段后，必須對其進行脫氣處理。去除活性相中溶解的微量氣體不僅有利于檢測，而且可以防止微量氧對樣品的活性相的影響。
3。運動相速度的選擇是柱內(nèi)運動相線速度的函數(shù)，采用不同的流速可以得到不同的柱效應(yīng)。對于特定的液相柱，為了找到的柱效，好采用佳的流速。對于內(nèi)徑為4.6mm的液相色譜柱，流速為1ml/min，內(nèi)徑為4.0mm時，流速為0.8mL/min。 當選用流速時，剖析時刻或許延伸。改變流動相洗滌強度的方法可以縮短分析時間(例如，在使用反相柱時，可以適當增加甲醇或乙腈的含量)。
試驗前，活性水相的制備效果好，特別是在夏季使用緩沖溶液作為活性相時。添加疊氮化鈉以防止細菌生長是好的。
流動相要求使用0.45μm的濾膜來去除顆粒雜質(zhì)。
運用HPLC級溶劑制造活動相，運用適宜的活動相可延伸液相色譜柱的運用壽數(shù)，進步柱功能。
三. 液相色譜柱的保護
1. 液相色譜柱的平衡
反相液相色譜柱在乙腈/水中保存，經(jīng)工廠檢驗。柱應(yīng)用甲醇或乙腈柱體積的10-20倍洗滌。請確保在樣品分析中使用的流動相和乙腈/水是相容的。每天有足夠的時間來平衡液相柱和流動相，您將在處理問題時獲得大的“補償”，您的液相柱的使用壽命將變得更長！業(yè)務(wù)步驟：
使用流動相平衡液相色譜柱，流速在平衡開始時緩慢增加，直到達到穩(wěn)定的基線(如果緩沖鹽或離子對試劑的流速較低，則需要較長的時間來平衡)。
如果活性相含有緩沖鹽，則應(yīng)注意純水的“過渡”，即需要用純水沖刷30分鐘以上才能開始日常分析。分析后，需要用純水清洗柱30分鐘，除去鹽緩沖液，然后用甲醇沖洗柱30分鐘。
2. 液相色譜柱的再生
對于長期液相色譜柱，柱效率往往降低(理論塔板數(shù)減少)。液相色譜柱可以再生，在有條件的實驗室中，應(yīng)該使用廉價的泵來再生色譜柱。
建議用來沖刷柱子的溶劑體積
液相色譜柱的大小。柱體積中所用溶劑的體積。
125-4mm 1.6ml 30ml
250-4 mm 3.2ml 60ml
250-10mm 20ml 400ml
挑選再生辦法：
極性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料）的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非極性固定相(如反相色譜填料RP-18、RP-8、CN等)的再生：水/乙腈/氯仿(或異丙醇)/乙腈/水
當NH2改性的液相色譜柱再生時，由于NH2可能以銨離子的形式存在，洗滌后應(yīng)先用0.1M氨洗，再用水洗，直至堿液完全排出。
0.05M稀硫酸可用于凈化被污染的液相色譜柱。如果有機溶劑/水的簡單處理不能完全去除吸附在硅膠表面的雜質(zhì)，則洗滌后用0.05m的稀硫酸進行洗滌是非常有效的。
3. 液相色譜柱的保護
用柱前保護分析柱(硅膠在極性活性相/離子活性相中有一定的溶解度)
大多數(shù)反相液相色譜柱的pH穩(wěn)定尺度為2~7.5，盡量不超過液相色譜柱的pH尺度。
防止活動相組成及極性的劇烈改變
活動相運用前有必要經(jīng)脫氣和過濾處理
如果使用極性或離子緩沖溶液作為活性相，則在測試結(jié)束時，色譜柱應(yīng)清洗干凈，并儲存在甲醇或乙腈中。
氯化物的溶劑對它有一定的腐蝕性。因此，需要注意的是，為了防止腐蝕，柱和連接管在很長一段時間內(nèi)不能保持這樣的溶劑。
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