精油檢測(cè)之高效液相色譜法和氣相色譜法的區(qū)別在哪里？
精油檢測(cè)之高效液相色譜法和氣相色譜法的區(qū)別
應(yīng)用范圍
氣相
由于分離性能好、靈敏度高、分析速度快、操作方便等技術(shù)條件的限制，用氣相色譜法分析沸點(diǎn)過(guò)高或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)比較困難一般情況下，500℃以下不易揮發(fā)或易分解的部分可采用衍生法或裂解法。
液相
高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣?，因此，不受試樣揮發(fā)性的限制對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大大于400以上的有機(jī)物（些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的75％～80％）原則上，都可應(yīng)用高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行分離、分析據(jù)統(tǒng)計(jì)，在已知化合物中能用氣相色譜分析的約占20％，而能用液相色譜分析的約占70～80％。
精油檢測(cè)之高效液相色譜法和氣相色譜法的區(qū)別
氣相儀器構(gòu)造
氣相
由載氣源、進(jìn)樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成進(jìn)樣部分、色譜柱和檢測(cè)器的溫度均在控制狀態(tài)。
1. 柱箱：
色譜柱是氣相色譜儀的核心，樣品中的組分在色譜柱中重復(fù)分布后被分離，所以分析的目的是安裝色譜柱由于色譜柱的兩端分別與進(jìn)樣器和檢測(cè)器相連，進(jìn)樣器和檢測(cè)器的下端（接頭）插入柱盒柱箱可安裝各種填料柱和毛細(xì)管柱，柱(樣)需要在一定的溫度條件下工作，柱箱的溫度由微機(jī)控制，柱箱內(nèi)的梯度較小，設(shè)計(jì)合理。
對(duì)于某些成分復(fù)雜、沸點(diǎn)范圍寬的樣品，柱盒也可用于三級(jí)溫度程序控制。且程序設(shè)置完成后，自動(dòng)運(yùn)行無(wú)需人工干預(yù)，冷卻時(shí)也可自動(dòng)開(kāi)門(mén)排熱..
2. 進(jìn)樣器：
注射器的作用是將樣品送入色譜柱對(duì)于液體樣品，噴射器也必須蒸發(fā)。因此，采用微機(jī)控制噴油器的溫度。
根據(jù)色譜柱的不同和進(jìn)樣方法的不同，有五種注射器可供選擇：
填充柱進(jìn)樣器
毛細(xì)管不分流進(jìn)樣器附件
毛細(xì)管分流進(jìn)樣器附件
毛細(xì)管分流/不分流進(jìn)樣器
六通閥氣體進(jìn)樣器
精油理化指標(biāo)檢測(cè)之高效液相色譜法和氣相色譜法的區(qū)別
3. 檢測(cè)器：
檢測(cè)器的作用是將樣品的化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為物理信號(hào)（電信號(hào)）檢測(cè)器也需要在一定的溫度條件下才能正常工作，因此采用微機(jī)對(duì)檢測(cè)器進(jìn)行溫度控制。
根據(jù)各種樣品的化學(xué)和物理性質(zhì)，有五種檢測(cè)器可供選擇：
氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）；
熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD）；
電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；
氮磷檢測(cè)器（NPD）；
火焰光度檢測(cè)器（FPD）；
4. 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：
該系統(tǒng)能夠?qū)y(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、存儲(chǔ)、顯示、打印和處理，從而正確地進(jìn)行樣品的分離、制備和鑒定。
高效液相儀器構(gòu)造
液相
高效液相色譜儀主要由注射系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。
1. 進(jìn)樣系統(tǒng)
一般使用：膜片噴油器或高壓噴射之間完成注射操作，取樣量是恒定的。有利于提高分析樣品的重復(fù)性。
2. 輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47～4.4×107Pa流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度，這對(duì)提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、pH值或改用。
精油理化指標(biāo)檢測(cè)之高效液相色譜法和氣相色譜法的區(qū)別
3. 分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱、連接噴嘴和恒溫器。
當(dāng)色譜柱長(zhǎng)度一般為10-50cm，需要同時(shí)使用兩個(gè)色譜柱時(shí)，可在兩個(gè)色譜柱之間加一個(gè)內(nèi)徑為2-5M的連接管，連接管采用優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成。柱上設(shè)有直徑為5-10μm的固定相，由基體和固定液組成。固定相中的基質(zhì)是由高機(jī)械強(qiáng)度的樹(shù)脂或硅膠制成，它們與硅膠表面一樣惰性，此外，硅酸基因的表面已被機(jī)械涂覆，這與氣相色譜固定相的制備相同，或與不同長(zhǎng)度碳鏈或配體的磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或烷基等多種基因化學(xué)偶聯(lián)的有機(jī)化合物。
因此，具有不同固定相對(duì)結(jié)構(gòu)的這類(lèi)物質(zhì)具有良好的選擇性如在多孔硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素PSA可以分離成纖維細(xì)胞中的糖蛋白。
另外，固定相質(zhì)粒體積小，柱床容易達(dá)到均勻致密狀態(tài)，容易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)基質(zhì)的粒徑小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)域的傳質(zhì)短這有利于減小帶寬，提高分辨率。根據(jù)塔效理論分析，基體尺寸越小，理論塔板數(shù)n越大。
進(jìn)一步證明，當(dāng)基體顆粒尺寸較小時(shí)，分辨率會(huì)得到提高。此外，高效液相色譜(HPLC)的恒溫器可以將溫度從室溫調(diào)節(jié)到60℃。通過(guò)提高傳質(zhì)速率和縮短分析時(shí)間，可以提高色譜柱的效率。
4. 檢測(cè)系統(tǒng)
高效液相色譜中常用的檢測(cè)器有三種：紫外檢測(cè)器、差折射檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器
（1）紫外檢測(cè)器
檢測(cè)器適合于檢測(cè)紫外(或可見(jiàn))吸收樣品。
其特點(diǎn)：應(yīng)用范圍廣如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等；
靈敏度高檢測(cè)下限為10-10g/ml；
線(xiàn)性范圍寬；對(duì)溫度和流速變化不敏感；能檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品。
（2）示差折光檢測(cè)器
通過(guò)差分折射率檢測(cè)器可以檢測(cè)出來(lái)自流動(dòng)相的任何不同折射率的樣品，該檢測(cè)系統(tǒng)可用于碳水化合物的檢測(cè)。該系統(tǒng)通用性強(qiáng)，操作方便，但靈敏度低（檢測(cè)限為10-7g/ml）。流動(dòng)相的變化會(huì)引起折射率的變化。因此，不適合痕量分析或梯度洗脫樣品檢測(cè)。
（3）熒光檢測(cè)器
對(duì)于具有熒光的物質(zhì)，發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與在某些條件下的物質(zhì)的濃度成比例。因此，本檢測(cè)器僅適用于有機(jī)化合物如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺、維生素和某些蛋白質(zhì)等的熒光測(cè)定其靈敏度高檢測(cè)限為10-12-10-14g/ml，可用于痕量分析和梯度洗脫。
精油理化指標(biāo)檢測(cè)之高效液相色譜法和氣相色譜法的區(qū)別
5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
該系統(tǒng)能夠?qū)y(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、存儲(chǔ)、顯示、打印和處理，從而正確地進(jìn)行樣品的分離、制備和鑒定。
高效液相色譜與氣相色譜法
優(yōu)點(diǎn)和不足分析
不經(jīng)化學(xué)處理，氣相色譜法只能分離出20%的樣品，而高效液相色譜法能分析出80%的有機(jī)物。
氣相色譜中的流動(dòng)相是惰性的，它對(duì)組分沒(méi)有作用力，只起載體的作用，而高效液相色譜(HPLC)的流動(dòng)相不僅是載體，而且對(duì)組分也有一定的親和力，可以通過(guò)改變流動(dòng)相的類(lèi)型和組成來(lái)提高分離的選擇性。此外，還有許多化合物可以作為流動(dòng)相使用，而且選擇范圍很廣。
與氣相色譜法相比，高效液相色譜法的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是樣品的回收相對(duì)容易。只要將打開(kāi)的容器放在柱的末端，就可以很容易地收集分離的組件回收率是定量的，可以用于提純和制備純度足夠的單一物質(zhì)。
近年來(lái)，檢測(cè)器的靈敏度不如氣相色譜法必須特別注意“柱外效應(yīng)”對(duì)柱效率和色譜分離的影響。
