《中國藥典》關(guān)于0461 X射線熒光光譜法標(biāo)準(zhǔn)草案的公示

2024.5.06

　　關(guān)于0461 X射線熒光光譜法標(biāo)準(zhǔn)草案的公示

　　我委擬修訂《中國藥典》0461 X射線熒光光譜法。為確保標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性、合理性和適用性，現(xiàn)將擬修訂的0461 X射線熒光光譜法公示征求社會各界意見（詳見附件）。公示期自發(fā)布之日起三個月。請認(rèn)真研核，若有異議，請及時在線反饋，并附相關(guān)說明、實驗數(shù)據(jù)和聯(lián)系方式。來函需打印后加蓋公章，個人來函需打印后本人簽名，并郵寄至我委通訊地址。

　　公示期滿未回復(fù)意見即視為對公示標(biāo)準(zhǔn)草案無異議。

　　聯(lián)系人：徐昕怡、朱冉

　　電話：010-67079522、010-67079581

　　通信地址：北京市東城區(qū)法華南里11號樓國家藥典委員會辦公室

　　郵編：100061

　　附件 0461 X 射線熒光光譜法修訂草案公示稿（第一次）

0461 X 射線熒光光譜法

　　X 射線熒光光譜法（XRF）是一種基于測量由初級 X 射線激發(fā)的原子內(nèi)層電子產(chǎn)生特征次級 X 射線以確定樣品中元素種類和含量的分析方法。XRF可用于液體、粉末及固體材料的定性、定量分析。XRF 儀可分為波長色散型（WD）和能量色散型（ED）。波長色散型 X 射線熒光分析儀功率大，熒光強(qiáng)度高，測量時間短，具有較高的測量精度，但需要對被測量樣品進(jìn)行簡單處理，適用于原料、制劑的精確檢測和質(zhì)量控制；能量色散型 X 射線熒光分析儀雖然測量精度稍差，但無需對樣品作特別復(fù)雜的處理而直接進(jìn)行測量，對樣品也沒有任何損壞，因此可直接用于生產(chǎn)過程控制。

　　當(dāng) X 射線照射到供試品時，供試品中的各元素被激發(fā)而輻射出各自的熒光 X 射線。通過準(zhǔn)直器經(jīng)分光晶體分光，按照布拉格定律產(chǎn)生衍射，使不同波長的熒光 X射線按照波長順序排列成光譜，不同波長的譜線由探測器在不同的衍射角上接收。根據(jù)測得譜線的波長識別元素種類；根據(jù)元素特征譜線的強(qiáng)度與元素含量間的關(guān)系，計算獲得供試品中每種元素含量百分?jǐn)?shù)，即為 X 射線熒光光譜分析法。

　　1．對儀器一般要求

　　 X 射線熒光光譜儀主要由光源（X 射線管）、分光系統(tǒng)和檢測器等組件構(gòu)成。

　　（1）光源

　　兩種類型的 X 射線熒光光譜儀都需要用 X 射線管作為激發(fā)光源。作為 X 射線熒光光譜儀的光源，要求有足夠的強(qiáng)度、連續(xù)的光譜、穩(wěn)定的光強(qiáng)。

　　（2）分光系統(tǒng)?

　　波長色散型 X 射線熒光光譜儀的分光系統(tǒng)的主要部件是晶體分光器，它的作用是通過晶體衍射現(xiàn)象把不同波長的 X 射線分開。能量色散型 X 射線熒光光譜儀是利用熒光 X 射線具有不同能量的特點，將其分開并檢測，不必使用分光晶體。

　　（3）檢測器?

　　檢測器的作用是將 X 射線熒光光量子轉(zhuǎn)變成一定形狀和數(shù)量的電脈沖，用于表征 X 射線熒光的能量和強(qiáng)度。常用探測器種類有：正比計數(shù)器（流氣式或封閉式）、閃爍計數(shù)器、半導(dǎo)體計數(shù)器等。

　　2. 供試品的制備

　　液體供試品可以直接進(jìn)樣分析，固體供試品可以直接壓片或與適當(dāng)?shù)妮o劑混合處理后壓片進(jìn)樣分析。供試品的粒度、樣品量、制樣壓力等因素對測試結(jié)果有一定的影響，定量分析時，對于化學(xué)藥品一般建議樣品粉碎過 200 目篩，中藥材及復(fù)方制劑一般全部過 100 目篩，混合均勻，挑選合適的樣品架制樣，樣品量及制樣壓力的確認(rèn)應(yīng)經(jīng)過預(yù)實驗確定。

　　3. 儀器的校正和檢定

　　儀器使用前應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或其他可溯源的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校正。

　　4. 分析線?

　　X 射線熒光光譜法中一般應(yīng)選擇強(qiáng)度大、干擾少、背景低的特征譜線作為分析線。

　　5．定性分析?

　　根據(jù)每種元素特征 X 射線熒光譜線可對供試品中所含元素種類進(jìn)行定性分析。

　　6. 定量測定法

　　（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法

　　液體樣品采用元素不同濃度的對照品或者采用元素分級稀釋法制備不同濃度的對照品供檢測分析用，固體樣品采用不同含量的對照品或者采用標(biāo)準(zhǔn)加入法制備不同含量的對照品供檢測分析用。對照品應(yīng)與供試品的化學(xué)組成和物理性質(zhì)等方面一致。分別測定系列對照品的 X 射線強(qiáng)度，以待測元素的濃度（含量）為橫坐標(biāo)，以X 射線強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)在測定前或定期進(jìn)行校準(zhǔn)。

　?。?）內(nèi)標(biāo)法

　　將相同量的內(nèi)標(biāo)元素分別加入到待測元素已知并且元素濃度（含量）呈梯度的一組樣品中制成系列對照樣品。在選定的分析條件下分別測量對照品中待測元素與內(nèi)標(biāo)元素的 X 射線強(qiáng)度，計算待測元素與內(nèi)標(biāo)元素的 X 射線強(qiáng)度比，以該強(qiáng)度比為縱坐標(biāo)，待測元素濃度（含量）為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。內(nèi)標(biāo)元素的選擇應(yīng)遵循以下原則：①不能對待測元素產(chǎn)生譜圖干擾；②不受待測樣品基體元素的干擾；③不受待測元素干擾；④質(zhì)量數(shù)盡量與待測元素接近。在待測樣品中也加入相同量的同一種內(nèi)標(biāo)元素，制成供試品，同法測量并求得X 射線強(qiáng)度比，由標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得待測元素的濃度（含量）。

　　（3）標(biāo)準(zhǔn)加入法

　　取相同質(zhì)量供試品（或相同體積供試品溶液）6 份，除第一份外，在其他幾份中，分別精密加入不同量的待測元素對照品（或?qū)φ掌啡芤海瞥上盗写郎y樣品；在選定的分析條件下分別測定，以待測元素 X 射線強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，待測元素加入量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將標(biāo)準(zhǔn)曲線延長交于橫坐標(biāo)，由交點與原點的距離求算供試品中待測元素的濃度（含量）。此法要求待測元素的濃度（含量）與 X 射線強(qiáng)度呈線性關(guān)系。

　　（4）數(shù)學(xué)校正法

　　數(shù)學(xué)校正法中的經(jīng)驗系數(shù)法、經(jīng)驗系數(shù)與基本參數(shù)聯(lián)用法等，用于各種不同分析對象時，可有效地計算和校正由于基體的吸收和增強(qiáng)效應(yīng)對分析結(jié)果的影響，對于譜線干擾和計數(shù)死時間，也可以得到有效的校正。經(jīng)驗系數(shù)法是用已知標(biāo)樣，測出共存元素之間的影響系數(shù)，代入含量或強(qiáng)度公式，校正共存元素對分析元素的影響。基本參數(shù)法是基于樣品中每個元素的含量對應(yīng)于其分析線的相對強(qiáng)度，全部相對強(qiáng)度的總和，對應(yīng)其百分含量的總和。根據(jù)該原理，由測得的分析線強(qiáng)度和一些表示熒光強(qiáng)度的基本參數(shù)（初級 X 射線光譜的分布、吸收系數(shù)、熒光效率、吸收限等）便可求出樣品中分析元素的含量。經(jīng)驗系數(shù)與基本參數(shù)相結(jié)合法（XFP），是利用基本參數(shù)法，計算出標(biāo)樣的理論強(qiáng)度，把標(biāo)樣中的元素當(dāng)作純元素求出其相對強(qiáng)度，用經(jīng)驗系數(shù)法對標(biāo)樣回歸求出影響系數(shù)，然后利用求出的影響系數(shù)和標(biāo)樣，即可對試樣定量測定。?

　　7. 方法學(xué)驗證與確認(rèn)?

　　XRF方法驗證的目的是證明測量方法適用于其預(yù)期目的，XRF分析方法的驗證過程要求對線性、范圍、準(zhǔn)確度、專屬性、精密度、定量限和耐用性進(jìn)行測試。

　?。?）準(zhǔn)確度?

　　對于藥物或藥物制劑的主要成分（類型 I）的定量測定或雜質(zhì)含量或限度（類型 II）測試，分析人員可以通過使用適當(dāng)?shù)囊阎貪舛鹊幕w進(jìn)行回收率實驗來確定其準(zhǔn)確性。也可以使用合適的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為檢測標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對。另一個可接受的做法是使用驗證的XRF方法與已建立的分析方法的分析結(jié)果進(jìn)行比較。當(dāng)分析人員使用標(biāo)準(zhǔn)加入法時，準(zhǔn)確度的評估是基于最終的截距濃度，而不是從單個標(biāo)準(zhǔn)加入量計算的回收率?？山邮芊秶夯瘜W(xué)藥物和藥物制劑含量的回收率為98.0%~102.0%，中藥復(fù)方制劑含量的回收率為 90.0%~110.0%，雜質(zhì)分析回收率70.00%~150.0%。

　　（2）重復(fù)性

　　在規(guī)定范圍內(nèi)，分析人員應(yīng)通過測量同一濃度（相當(dāng)于 100%濃度水平）的供試品的 6 個測定結(jié)果進(jìn)行評價。或者可以設(shè)計 3 種不同濃度，每種濃度分別制備 3份供試品溶液進(jìn)行測定，用 9 份樣品的測定結(jié)果進(jìn)行評價。這三個濃度應(yīng)該足夠接近，以便在濃度范圍內(nèi)的重復(fù)性是恒定的。在這種情況下，三種濃度的可重復(fù)性合并與驗收標(biāo)準(zhǔn)相比較。可接受范圍：藥物含量測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過 1.0%，藥物制劑含量測定不超過 2.0%，中藥復(fù)方制劑含量測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過10.0%，雜質(zhì)分析的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過 20.0%。

　?。?）中間精密度?

　　分析人員應(yīng)確定隨機(jī)事件對該方法的分析精度的影響。典型的變量包括在不同的時間進(jìn)行分析，使用不同的設(shè)備，或者有兩個或更多的分析人員使用這個方法。至少有兩個以上這些因素的組合，共 6 個實驗來進(jìn)行中間精密度的評估。一般而言，原料藥檢測的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過 1.0%，藥物制劑檢測的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過3.0%，中藥復(fù)方制劑檢測的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過 10.0%，雜質(zhì)分析檢測的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過 25.0%。

　　（4）專屬性

　　方法必須明確地測定每個組份中可能存在的分析元素，包括相應(yīng)的基質(zhì)成份在內(nèi)。

　　（5）定量限

　　定量限（LOQ）可以通過計算一個空白不少于 6 次重復(fù)測量的標(biāo)準(zhǔn)偏差乘以 10 來進(jìn)行估算，也可以使用其他合適的方法來評估。

在代表性樣品中加入適量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使待測元素的濃度與 LOQ 濃度相似，進(jìn)行檢測，以確定準(zhǔn)確度。要求分析方法應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的 50%的水平能精密、準(zhǔn)確地對供試品進(jìn)行分析。

　?。?）線性

　　分析人員應(yīng)該在分析物濃度和校正的XRF響應(yīng)之間建立線性關(guān)系，在濃度范圍內(nèi)制備不少于 5 個濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，覆蓋供試品的預(yù)期濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計方法進(jìn)行評估，如最小二乘回歸法。回歸直線的相關(guān)系數(shù) R、截距 y 和斜率必須確定。對于沒有分析物濃度和XRF響應(yīng)之間的線性關(guān)系的實驗，必須采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計方法來描述分析響應(yīng)。要求對類型 I 含量測定的 R 不低于 0.995，類型 II 定量測定的 R 不低于 0.99。

　　（7）范圍

　　范圍系指分析方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。以 100.0%為中心的可接受范圍為 80.00%~120.0%。以非中心驗收標(biāo)準(zhǔn)為在規(guī)格的下限 10.0%到超過規(guī)格上限的 10.0%。含量均勻度可接受范圍為 70.0~130.0%。對于類型 II，可接受范圍為 50.0%~120.0%。

　　（8）耐用性

　　分析測量的可靠性應(yīng)通過對實驗參數(shù)的有意調(diào)整來證明。對于 XRF，包括在指定的存儲條件下測量供試品的穩(wěn)定性。驗收標(biāo)準(zhǔn)為在試驗參數(shù)變化后，標(biāo)準(zhǔn)或樣品響應(yīng)的測量，與已確定參數(shù)測量結(jié)果的偏差不超過 2.0%（藥物制劑檢測）和不超過 20.0%（雜質(zhì)分析）。

　　（9）確認(rèn)?

　　XRF 方法確認(rèn)的目的是證明采用的方法能夠以合適的準(zhǔn)確度、靈敏度和精密度執(zhí)行。如果方法確認(rèn)不成功，則該方法可能不適用于正在測試的項目，需要開發(fā)和驗證備選方法。

　　0461 X 射線熒光光譜法修訂說明

　　2020年版《中國藥典》首次收載了 X射線熒光光譜法。為使該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌，此次借鑒國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和研究成果，并根據(jù)我國實際情況進(jìn)行修訂。修訂的主要內(nèi)容包括對前言、供試品的制備、定量測定法相關(guān)內(nèi)容的補(bǔ)充完善，以及增訂方法學(xué)驗證與確認(rèn)中準(zhǔn)確度、重復(fù)性、中間精密度、專屬性、定量限、線性、范圍、耐用性、確認(rèn)相關(guān)的內(nèi)容。

　　紅色字體為刪除內(nèi)容，藍(lán)色字體為增訂內(nèi)容

附件 ?0461 X射線熒光光譜法修訂草案公示稿（第一次） (1).pdf